Hallo Leute,
Wie erfolgt eigentlich der Hydridtransfer bei der Lactatdehydrogenase? Aus Pyruvat wird Lactat und aus NADH wird NAD+. Ist vielleicht das NADH der Hydridüberträger???
I need help, please...

Hilft dir das??
Laktat-Dehydrogenase (LDH) Test


Der LDH-Test ist ein sehr häufig angewendeter In-vitro-Zytotoxizitätstest, dessen Prinzip auf der Bestimmung der Enzymaktivität von Laktatdehydrogenase (LDH) im Zytoplasma basiert, das aus zerstörten oder beschädigten Zellen freigesetzt wird und somit im Überstand (in vitro im Zellkulturmedium) nachweisbar ist. Die Laktatdehydrogenase ist ein stabiles zytoplasmatisches Enzym, das sehr schnell in das Zellkulturmedium abgegeben wird, wenn die Zellmembran zerstört ist. Die LDH-Aktivität wird mittels eines enzymatischen Tests bestimmt. Es finden zwei Redoxreaktionen statt: Im ersten Schritt wird Laktat durch die Oxidoreduktase LDH zu Pyruvat oxidiert, während das Coenzym NAD+ durch die Übertragung von Wasserstoff (vom Substrat Laktat) zu NADH/H+ reduziert wird. Im zweiten Schritt transferiert der im Testreagenz enthaltene Katalysator Diaphorase Wasserstoff vom entstandenen NADH/H+ auf das schwach gelbfarbene Tetrazolium-Salz INT (2-[4-Iodophenyl]-3-[4-nitrophenyl]-5-phenyltetrazoliumchlorid), welches dadurch zu dem rot gefärbten Formazan-Salz reduziert wird, während das NADH/H+ zu NAD+ oxidiert wird. Diese Farbstoffbildung kann kolorimetrisch mit einem Photometer bei einer Wellenlänge von 490 nm (Referenzwellenlänge 690 nm) gemessen werden. Je höher der Grad der Zellschädigung ist, desto größer ist die Menge an freigesetztem LDH im Überstand (Medium). Diese Menge an LDH korreliert direkt mit der Menge an gebildetem Formazan-Salz und ist daher direkt proportional zur Anzahl geschädigter Zellen. Als Referenz dienen Kontrollansätze, d.h. Zellen, die unter Zugabe des Detergens Triton-X-100 (1 %, in Zellkulturmedium verdünnt) vollständig lysiert wurden und deren Substratumsetzung daher als maximal (100 %, Positivkontrolle) eingestuft wird, bzw. solche, die nur mit reinem Zellkulturmedium behandelt wurden und deshalb eine minimale (0 %, Negativkontrolle) LDH-Enzymaktivität im Überstand besitzen.

mospie

ja,

NADH + H+ ist überträger (carrier) von 2 elektronen und 2 protonen
( NADH + H+ --> NAD*+ + 2e- + 2 H+ )
pyruvat besitzt eine keto-gruppe(doppelbindung C=O ) an C2.
NADH + H+ liefert die 2 e- und 2 H+ um pyruvat zu reduzieren (zum alkohol an C2) , das produkt ist lactat


Lactat-DH katalysiert folgende reaktion(auch umgekehrt):

CH3-CO-COO*- + NADH + H+ -----> CH3-CH2OH-COO*- + NAD*+

dies ist eine wichtige reaktion im stoffwechsel ,da NAD*+ zurückgebildet wird (aus NADH aus der glykolyse). -->damit die glykolyse weiter ablaufen kann und es nicht zu einer anhäufung von pyruvat und NADH kommt
(dies beschreibt der cori-zyklus --> http://de.wikipedia.org/wiki/Cori-Zyklus )

heyy leutii ,


was ist der überstand in der chemie??
und wennn wie formoliert man das, wenn man es ohne beispiele erklären soll????


bittee schnelll le bb anna

Naja was könnte wohl der Überstand sein?!

Wenn du beispielsweise zentrifugierts hast du einen Bodensatz und eine Lösung, die darüber steht = Überstand.