von Equilibrium » 06.12. 2005 22:35
Man kann diese Gele auch selbst herstellen. Auch wenn die Arbeit etwas sehr nervig ist und das kaum noch selber gemacht wird.
Wie auch immer, bei mir auf der Schule waren sie der Meinung, das gehöre zur guten Allgemeinbildung eines Chemikers dazu:
Es wird ein Polyacrylamid Gel mit sehr niedrigem Bisacrylamid verwendet. D.h. das Gel ist extrem grobmaschig und wabbelig. Um das Gel überhaupt handhaben zu können, wird es auf die hydrophile Seite Folie gegossen, welche "schlauerweise" auch eine hydrophobe Seite besitzt (*patsch* und schon war das Gel vom Kollegen am Laborboden, falsche Seite).
Anyways: Bevor das Gel gebrauchsfertig ist, wird vorfokussiert. D.h. das Gel wir mit Polyampholyten (langkettige aliphatische Polyamino-polycarbonsäuren, sauteuer) beladen und erstmal schön lange laufen gelassen. Da an Anode und Kathode Elektrolyse von Wasser stattfindet, bildet sich um die Elektroden ein entsprechendes alkalisches bzw. saures Mileau. Die Polyampholyten wandern Richtung Anode/Kathode und werden dort neutralisiert und dank den endlos vielen Säure/Aminogruppen puffern sie fort an ihren eigenen pH Wert ab. Je mehr unterschiedliche Polyampholyten verwendet werden, desto feiner wird der pH Gradient.
Wenn das Gel vorfokussiert wurde, werden die Proben in der Mitte des Gel per Probenkamm aufgetupft (jaja vorsichtig, lätschertes Gel) und die eigentliche Fokussierung im pH Gradienten geht von Statten. Zur Auswertung wird pH gegen Laufstrecke geplottet.
Man kann diese Gele auch selbst herstellen. Auch wenn die Arbeit etwas sehr nervig ist und das kaum noch selber gemacht wird.
Wie auch immer, bei mir auf der Schule waren sie der Meinung, das gehöre zur guten Allgemeinbildung eines Chemikers dazu:
Es wird ein Polyacrylamid Gel mit sehr niedrigem Bisacrylamid verwendet. D.h. das Gel ist extrem grobmaschig und wabbelig. Um das Gel überhaupt handhaben zu können, wird es auf die hydrophile Seite Folie gegossen, welche "schlauerweise" auch eine hydrophobe Seite besitzt (*patsch* und schon war das Gel vom Kollegen am Laborboden, falsche Seite).
Anyways: Bevor das Gel gebrauchsfertig ist, wird vorfokussiert. D.h. das Gel wir mit Polyampholyten (langkettige aliphatische Polyamino-polycarbonsäuren, sauteuer) beladen und erstmal schön lange laufen gelassen. Da an Anode und Kathode Elektrolyse von Wasser stattfindet, bildet sich um die Elektroden ein entsprechendes alkalisches bzw. saures Mileau. Die Polyampholyten wandern Richtung Anode/Kathode und werden dort neutralisiert und dank den endlos vielen Säure/Aminogruppen puffern sie fort an ihren eigenen pH Wert ab. Je mehr unterschiedliche Polyampholyten verwendet werden, desto feiner wird der pH Gradient.
Wenn das Gel vorfokussiert wurde, werden die Proben in der Mitte des Gel per Probenkamm aufgetupft (jaja vorsichtig, lätschertes Gel) und die eigentliche Fokussierung im pH Gradienten geht von Statten. Zur Auswertung wird pH gegen Laufstrecke geplottet.