Ich beschäftige mich derzeit mit der Auftrennung eines Proteins. Es besteht grob gefasst aus zwei Teilen, einer langen und einer kurzen Sequenz. Die Unterschiede im pI-Wert sind minimal (0.5); außerdem haben beide Sequenzen einen sehr hohen pI-Wert (über 10).
Verwende derzeit präparative Chromatography (ÄKTA) um die zwei Varianten zu trennen - bis jetzt erfolglos. (Worte wie Salzgradient kann ich nicht mehr hören). Hätte es nun mit pH-Gradienten versucht, nur absorbieren viele Pufferbestandteile bei 214 nm (meine Sequenz enthält keine aromatische AS und absorbiert deswegen nicht bei 280 nm).
Falls jemand brauchbare Ideen für eine mögliche Trennung der beiden Sequenzen hat - immer her damit!
SEC darf nicht verwendet werden
sonst hätte ich die Trennung beider Substanzen schon erfolgreich hinter mich gebracht.Liebe Grüße