HPLC

[MIRI]

Hallo,

zur Optimierung der HPLC verändert man doch entweder die Durchflussrate oder die Zusammensetzung (Polarität) der mobilen Phase.
Wie muss ich diese beiden Faktoren denn verändern, um eine optimale Trennung zu erhalten????

Danke

[MIRI]

bzw. welche Auswirkungen hat eine Veränderung der beiden Faktoren auf die Peaks, werden sie größer oder kleiner, schmäler oder breiter, wie verändern sich die Retentionszeiten und die Abstände zwischen den Peaks???

Weiß das irgendwer da draußen? Oder weiß jemand wo ich dazu was im i-net finde???

[AV]

Alles mit ein wenig Überlegen rauszubekommen

Eine Erhöhung der Flussrate führt natürlich zu einer geringeren Auftrennung, da die Analyten weniger Zeit haben, das Gleichgewicht zwischen mobiler und stationärer Phase zu bilden. Dafür werden sie aber auch schmaler und höher, da die Rückvermischung durch Diffusion auf der Säule geringer wird, die Peakform wird also tendentiell besser.
Such mal nach van Deemter-Gleichung (bzw- -Kurve)

Es gilt also, eine Flussrate zu finden, bei der die trennung gut ist, aber die Peakform trotzdem nicht leidet.
Hier kommt das Laufmittel ins Spiel:
Durch Änderung der Polarität der Laufmittel wird das Gleichgewicht der einzelnen Analyten zwischen den Phasen geändert. Welche Änderung jetzt aber welchen Analyten wie beeinflusst ist natürlich individuell und hängt von Säule, Laufmittel und eben Analyt ab ...