Menge Protein berechnen- bitte um Korrektur

[Dobby]

Hallo!

Angenommen ich muss in mein well 25 mikroliter 0,15 mikroM proteinlösung hineinpipettieren, die eine konzentration von 5 mg/ml und ein Protein-Mg von 10 kDa hat. Stimmt mein Gedankengang dann?:

Um auf die molarität der proteinlösung zu kommen:

5 g/l / 10000 g/mol -> 500 mikroM

Jetzt mit der Formel das Volumen berechnen:
C1 * V1 = C2 * V2

Dh 0,15 mikroM * 25 = 500 MikroM * X
X = 0,0075 mikroliter

D.h. ich sollte diese Menge (0,0075 mikroliter) von meiner proteinlösung entnehmen und dann mit Puffer auf die 25 Mikroliter auffüllen???

Da das so eine kleine Menge ist ... sollte ich da eine Vorverdünnung machen oder sowas? Danke für jede Hilfe!


Nachtrag: angenommen, ich sollte zusätzlich ein weiteres Protein dazugeben ... wie würde ich dann vorgehen?

[Nobby]

Da passt doch was nicht, die Lösung ist 0,15 μM dann kann sie doch nicht gleichzeitig 5 g/ l = 500 μΜ haben.

[Dobby]

Entschuldige - ich möchte am Ende in meinem well die 0,15 mikroM haben. Meine ursprüngliche Proteinlösung hat 2 mg/ ml. Ich soll die also verdünnen. Danke für die schnelle Antwort! Ich bin unendlich dankbar für deine Hilfe, weil ich das Gefühl hab, dass ich selbst den knoten nie lösen kann.. danke.

[Nobby]

Ja dann sollte man das auch so schreiben. Die Berechnung wäre dann richtig. Aber dosieren kann man so was nicht. Alle Werte mit 1000 multiplizieren. Also 7,5 μl auf 25 ml auffüllen.
Vorher war die Stammlösung 5 g/l warum jetzt nur 2g/l.

[Dobby]

Danke!!! Alles klar!:)

Darf ich dich bitte noch was ganz wichtiges fragen: wie geh ich denn vor, wenn ich unterschiedliche 2 Proteine reinmischen soll? Also wie rechne ich dann?

[Nobby]

Ja genauso, jedes Protein für sich ausrechnen und dann auf das Endvolumen auffüllen.

[Dobby]

Ok.. danke danke danke.

[Dobby]

Ich muss jetzt leider nochmals nerven. Wie gehe ich denn praktisch bei diesem vorverdünnen vor? Also wie setze ich das „alle werte mir 1000 multiplizieren“ in die Praxis um? Ich befürchte zwar, dass das eine blöde Frage ist aber ich hab das selber noch nicht im Labor gearbeitet und muss immer alles theoretisch lernen und versteh so viel nicht

[Nobby]

Also 7,5 μl auf 25 ml auffüllen.

Es kamen 0,0075 mikroliter heraus, die auf 25 μl aufgefüllt werden sollen. Also multipliziert mit 1000 ergibt 7,5 μl und 25 ml Endvolumen.
Man könnte gar 75 μl auf 250 ml auffüllen. Frage was für Pipetten vorhanden sind.

[Dobby]

Ja aber wieviel entnehme ich dann von dieser neu hergestellten Lösung, damit ich die richtige Menge Protein im well hab?

Und wie gehe ich allgemein bei solchen Fragestellungen vor? Es wird mir ja öfters unterkommen,dass eine Menge zu klein zum pipettieren ist und ich deshalb so eine vorverdünnung machen muss. Wie geht Man sowas am besten an? Hast du da ein System?

[Nobby]

25 μl natürlich. Das war das Zielvolumen